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常見流式細(xì)胞儀的細(xì)胞分選原理

更新時(shí)間:2022-06-07      點(diǎn)擊次數(shù):3591
流式細(xì)胞儀是對(duì)細(xì)胞進(jìn)行自動(dòng)分析和分選的裝置,可以檢測(cè)熒光染料從400nm到900nm的全部發(fā)射光譜(full spectrum);使用解析技術(shù),即使發(fā)射光譜重合度很高的兩個(gè)熒光染料,也可以輕松區(qū)別,可檢測(cè)多達(dá)51個(gè)通道。同時(shí)借助全新設(shè)計(jì)的光路系統(tǒng)和電子信號(hào)處理系統(tǒng),可以保證高靈敏度和分辨率。
開始使用流式細(xì)胞儀,第一步是準(zhǔn)備要分析的樣品。從細(xì)胞培養(yǎng)物,血液或分解的組織中獲得的細(xì)胞應(yīng)制成懸浮液。將該細(xì)胞懸浮液分成數(shù)個(gè)試管進(jìn)行染色,保留未染色細(xì)胞作為對(duì)照。通過添加標(biāo)記有熒光探針的抗體或染色細(xì)胞成分的染料對(duì)其他細(xì)胞樣品染色。分析細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)時(shí),首先必須將細(xì)胞固定(使用福爾馬林緩沖液)并進(jìn)行透化(使用透化劑),以使抗體和染料進(jìn)入細(xì)胞。細(xì)胞與抗體或染料孵育后,將細(xì)胞在緩沖液中洗滌,然后重懸在基于鹽的緩沖液中進(jìn)行分析。然后將準(zhǔn)備好的樣品引入流式細(xì)胞儀。
細(xì)胞分選原理:
在壓電晶體上加上頻率為30kHz的信號(hào),使之產(chǎn)生同頻率的機(jī)械振動(dòng),流動(dòng)室也隨之振動(dòng),這樣通過測(cè)量區(qū)的液柱斷裂成一連串均勻的液滴。
在細(xì)胞形成液滴以前,各類細(xì)胞的特性已在測(cè)量區(qū)被測(cè)定并儲(chǔ)存。如果其特性與要分選的細(xì)胞相同時(shí),儀器就在這類細(xì)胞形成液滴時(shí)給該液滴充與指定的電荷,這樣,當(dāng)被選定的細(xì)胞形成液滴時(shí)就帶有特定的電荷,未被選定的細(xì)胞形成的細(xì)胞液滴及不含細(xì)胞的空白液滴不被充電,也就不帶電荷。
帶有電荷的液滴向下落入偏轉(zhuǎn)板間的靜電場(chǎng)時(shí),依據(jù)所帶電荷符號(hào)向左或向右偏轉(zhuǎn),落入指定的收集器內(nèi),不帶電荷的液滴不發(fā)生偏轉(zhuǎn),垂直落入廢液槽中排出,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分類。
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